Diagnóstico pré-natal utilizando material fetal isolado do sangue periférico materno / Prenatal diagnosis using fetal material isolated from maternal peripheral blood

As anomalias cromossômicas apresentam grande incidência entre os nativivos e natimortos, constituindo a maior causa de morte fetal em países desenvolvidos, no período perinatal. Tradicionalmente, o diagnóstico dessas cromossomopatias é feito por procedimentos invasivos, que não são isentos de complicações materno-fetais. O desenvolvimento de técnicas que permitem identificação e o isolamento de células fetais e de DNA fetal livre no sangue periférico materno tem permitido o diagnóstico precoce das anomalias cromossômicas, tornando-se, desse modo, uma área de intensas pesquisas. Estudos mais recentes também envolvem a identificação e quantificação de mRNA fetal na circulação materna, o que torna possível a análise da expressão gênica fetal durante a gestação. O resgate de material fetal em sangue periférico materno e sua utilização no diagnóstico de várias doenças fetais é uma área de grande interesse na medicina fetal atual. Estudos são necessários para se avaliar melhor o papel propedêutico dessas novas técnicas, assim como sua aplicabilidade na prática clínica rotineira.

Chromosomal abnormalities show great incidence among live birth and stillbirth, becoming the major fetal death cause during the perinatal period in developed countries. Traditionally, the diagnosis of these chromosomal abnormalities is performed through invasive techniques which are not free from maternal-fetal complications. The development of techniques that allows identification and isolation of fetal cells and free fetal DNA in peripheral maternal blood has afforded the early diagnosis of chromosomal abnormalities and, therefore, become an intensive area of research. Recent studies describe the identification and qualification of fetal mRNA in the maternal circulation, which makes possible fetal gene expression analysis during pregnancy. The identification of fetal material in maternal circulation and its value on the diagnosis of several fetal diseases is a great area of interest in the current fetal medicine. Studies are necessary to evaluate the best propedeutic role of these new techniques, as well as their applicability in the routine clinical practice.

Type 1 diabetes susceptibility determined by HLA alleles and CTLA-4 and insulin genes polymorphisms in Brazilians / Suscetibilidade ao diabetes tipo 1 determinada por alelos de HLA e polimorfismos nos genes CTLA-4 e insulina em brasileiros

INTRODUCTION:Type 1A diabetes mellitus (T1ADM) is a multifactorial disease in which genetic and environmental aspects are important to its development. The association of genetic variations with disease has been demonstrated in several studies; however, the role of some gene loci has not yet been fully elucidated. OBJECTIVE:To compare the frequency of HLA alleles and polymorphism in CTLA-4 and insulin genes in Brazilians with T1ADM and individuals without the disease, as well as to identify genetic markers that are able to discriminate between diabetic and non-diabetic individuals. METHODS: The presence of HLA DQB1, DQA1 and DRB1 alleles, as well as the -2221 MspI polymorphism in the insulin gene and 49 A/G in the CTLA-4 gene were identified by the "Time-resolved fluorometer" technique after hybridization with probes labeled with Eu (III) / Sm (III) and Tb (III). RESULTS: The DQB1 *0302 and DQA1 *03 alleles were identified as predisposed to T1ADM, and the DQB1 *0301 allele presented a protective effect against the disease.The DQA1 label proved to be able to differentiate between 71.13 percent of the diabetic and non-diabetic individuals.This value increased to 82.47 percent when the DQB1 label was added. No significant difference in the frequency of polymorphisms in the insulin and CTLA-4 genes was observed between the two groups. CONCLUSIONS: The genetic markers that best characterized and discriminated diabetic and non-diabetic individuals were the HLA DQA1 and DQB1.alleles.

INTRODUÇÃO: O diabetes melito tipo 1 (T1ADM) é uma doença multifatorial em que os aspectos genéticos e ambientais são importantes para o seu desenvolvimento. A associação das variações genéticas com a doença tem sido demonstrada em vários trabalhos, no entanto, o papel de alguns locos gênicos não foi ainda completamente elucidado. OBJETIVOS: Comparar a frequência de alelos do HLA e polimorfismos nos genes CTLA-4 e insulina em brasileiros com T1ADM e indivíduos sem a doença, além de identificar marcadores gênicos que sejam capazes de discriminar indivíduos diabéticos e não diabéticos. MÉTODOS: A presença dos alelos de HLA DQB1, DQA1 e DRB1, bem como dos polimorfismos -2221 MspI no gene da insulina e 49 A/G no gene CTLA-4, foram identificados por meio da técnica Time-resolved fluorometer, após hibridização com sondas marcadas com Eu (III)/Sm (III) e Tb (III). RESULTADOS: Os alelos DQB1*0302 e DQA1*03 foram identificados como sendo de predisposição ao T1ADM, e o alelo DQB1*0301 mostrou um efeito protetor à doença. Analisando somente o marcador DQA1, este mostrou ser capaz de diferenciar 71,13 por cento dos indivíduos entre diabéticos e não diabéticos, cujo valor aumentou para 82,47 por cento quando adicionado o marcador DQB1. A frequência dos polimorfismos nos genes da insulina e CTLA-4 não mostrou diferença significativa entre os dois grupos estudados. CONCLUSÕES: Os marcadores genéticos que melhor caracterizaram e discriminaram diabéticos e não diabéticos foram os alelos de HLA DQA1 e DQB1.

Isolamento, diferenciação e aspectos bioquímicos de células-tronco de líquido amniótico / Isolation, differentiation and biochemical aspects of amniotic fluid stem cell

As células-tronco mesenquimais (MSCs) são células com grande potencial de diferenciação e estão sendo recentemente introduzidas na clínica para tratamento de várias doenças. Possuem várias vantagens incluindo sua estabilidade fenotípica in vitro. OBJETIVO: isolamento das MSCs de líquido amniótico, sua expansão e a demonstração da sua capacidade de se diferenciar em células miogênicas e adipogênicas, sem alterar a estabilidade cromossomal em meio de cultura. MÉTODOS: a fim de avaliar a mudança funcional destas células, foram avaliados parâmetros bioquímicos nas células adipogênicas já diferenciadas e antes da diferenciação através da dosagem de triglicérides. A diferenciação em células musculares foi avaliada comparando os níveis de creatinofosfoquinase - CK, desidrogenase lática - LDH e aldolase produzidas por estas células antes e após diferenciação. RESULTADOS: os níveis de triglicérides foram significativamente maiores nas células diferenciadas, mostrando ainda a formação de grânulos intracitoplasmáticos. Todos os outros valores obtidos foram significativamente maiores nas células miogênicas diferenciadas quando comparadas às não diferenciadas. CONCLUSÃO: os resultados sugerem que estes protocolos podem ser usados para avaliar diferenciação de células-tronco em células adipogênicas e miogênicas, e que o líquido amniótico pode ser uma fonte para obtenção destas células.

The mesenchymals stem cells (MSCs) are cells with the great potential of differentiation are being introduced in the clinic for treatment of several diseases. Mesenchymal stem cells have several advantages including the stability of their phenotype in vitro. BACKGROUND: isolation of MSCs in amniotic fluid, its expansion and the demonstration of the capacity of these cells to differentiate in adipogenic and miogenic cells, without to change the chromosomal stability of the MSCs in culture. METHODS: in order to evaluate the functional change of these cells, were gotten values of the differentiated adipogenic cells and not differentiated through the dosage of triglycerides. The miogenic nature of the differentiated cells was analyzed comparing the creatine kinase - CK, lactic dehydrogenase - LDH and aldolase produced by the cells. RESULTS: the values of triglycerides were significantly higher in differentiated cells, showing intracitoplasmatic granule form after differentiation. All the biochemical characters were significantly higher in differentiated miogenic cells. CONCLUSIONS: this study suggests that the standardized protocol of differentiation can be used in the attainment of cells with characteristics of adipogenic and muscular cells, from amniotic fluid.

Importância da identificação das mutações do protooncogene RET e sua atuação no desenvolvimento dos diversos fenótipos das neoplasias endócrinas múltiplas tipo 2 / Importance of RET proto-oncogene mutations identification and its performance in thedevelopment of the multiples endocrines neoplasias type 2 several phenotypes

A hereditariedade autossômica dominante da neoplasia endócrina múltipla tipo 2 (NEM 2) relaciona-se à ativação do proto-oncogene RET, através de mutações missense. As mutações do RET são encontradas em 95% dos casos índices de NEM 2 e apresentam relação direta entre sua localização codon específica e os diversos fenótipos desenvolvidos, dentre eles, carcinoma medular datireóide, feocromocitoma e/ou hiperparatireoidismo. Baseando-se em análises bioquímicas e genéticas, é possível efetuar um diagnósticoprematuro, viabilizando a intervenção cirúrgica em tempo hábil. A periodicidade da monitorização bioquímica é ditada pelo fenótipopresente, pelas manifestações clínicas familiares e pelo genótipo RET. A recomendação da análise genética deve ser feita a todos indivíduos afetados e também a seus ascendentes e descendentes diretos, caso alguma mutação esteja presente; permitindo identificar os portadores de mutações RET, previamente ao início da sintomatologia. Neste trabalho, serão discutidos os aspectos molecularesdos diversos fenótipos da NEM 2, bem como a importância da identificação genotípica do proto-oncogene RET e sua interação com os testes bioquímicos visando o diagnóstico precoce, prevenção, monitorização, screening familiar e, portanto, maior sobrevidado paciente.

The dominant autossomic hereditarity of the multiple endocrine neoplasia type 2 (MEN 2) is related to RET proto-oncogene activation, through mutations missense. RET mutations are found in 95% of MEN 2 index cases and present direct relation between its specific localization codon and the diverse developed phenotypes, among them, medullary thyroid carcinoma, pheochromocytoma and/or hyperparathyroidism. Being based on biochemists and genetics analyses, it is possible to perform a premature diagnosis, making possible a surgical intervention in the right time. The biochemist monitoring regularity is determined by present phenotype, the familiar clinical manifestations and RET genotype. The recommendation of the genetic analysis must be made to all affected individuals and also their ascendants and descendants, in case some mutation is present, allowing to identify the RET mutations carriers previously to the beginning of the symptomatology. In this work, the molecular aspects of MEN 2 diverse phenotypes will be discussed, as well as the importance of the RET proto-oncogene genotypic identification and its interaction with the biochemists tests aiming the precocious diagnosis, prevention, monitoring, familiar screening e, therefore, the patient’s longer survival.

Estudo do gene da glicoquinase em famílias brasileiras com suspeita de diabete melito da maturidade no jovem e estudo da secreçäo de insulina e pró-insulina nos indivíduos afetados / Study of the gene of glicoquinase in Brazilian families with suspicion of diabetes mellitus of the maturity in the young and study of secretions insulin and pro-insulin in the affected individuos

O diabete melito da maturidade no jovem (DMMJ) é caracterizado pelo seu aparecimento precoce (25 anos) e herança genética autossômica dominante. DMMJ é uma síndrome geneticamente heterogênea, sendo que mutaçöes do gene da enzima glucokinase (GCK) säo a sua causa mais freqüente, na França. Através da técnica do polimorfismo de conformaçäo de fitas simples (SSCP) näo radioativa foi realizado o estudo do gene da GCK em 17 famílias com suspeita clínica de DMMJ. As bandas com migraçäo anômala observadas foram seqüenciadas. Foram encontradas mutaçöes nos exons 7 e 9 do gene da GCK em duas famílias (Q e P), respectivamente, e uma alteraçäo no exon 1 na família J. Neste caso, a filha do propósito apresentou uma variaçäo homozigótica em dois exons (1a e 1b), que sugere um polimorfismo, uma vez que a ausência da funçäo da GCK é aparentemente incompatível com a sobrevivência. A família Q apresentou uma mutaçäo no exon 7, transformando uma glutamina em códon de parada na posiçäo 248, que foi detectada no propósito e em três filhos. Os demais membros da família que näo eram diabéticos, inclusive os pais do propósito, näo apresentaram a mutaçäo. O estudo de impressöes digitais de DNA confirmou a paternidade, sendo este indivíduo a primeira mutaçäo desta família. A família P apresentou uma mutaçäo no exon 9, transformando de valina para um códon de parada na posiçäo 401. A alteraçäo foi dectada no propósito, no seu filho, e em 5 de seus irmäoa que apresentavam hiperglicemia. A mutaçäo näo foi encontrada na mäe, na tia e na irmä do propósito, todas com obesidade e diabete näo insulino-dependente de desenvolvimento tardio. O pai do propósito, já falecido (portador obrigatório) näo foi testado. Teste oral de tolerância à glicose (TTG) foi realizado nas famílias com mutaçäo na GCK para estudo da secreçäo de insulina e pró-insulina, utilizando para isto, ensaios específicos. Verificamos que a secreçäo de insulina encontrava-se diminuida nos indivíduos GCK-mutantes em ambas as famílias. A secreçäo de pró-insulina encontrava-se dentro dos valores da normalidade nos indivíduos da família Q e aumentada nos indíduos da família P. Com três indivíduos desta última família apresentavam diabete sem mutaçäo para o gene da GCK, isto sugeria a presença de outro gene diabetogênico nesta família. A pró-insulina esteve positivamente correlacionada à obesidade (r=o,66; p<0,0001) e foi a variável independente que mais se associou ao índice da massa corporal...(au)

"Stiff-Man syndrome"associada a poliendocrinopatia autoimune : relato de um caso / Stiff-man syndrome associated with autoimune polyndocrinopathy : report of a case

Os autores relatam o caso de uma paciente de 29 anos, parda, portadora de "stiff-man syndrome" (SMS) associada a poliendocrinopatia do tipo II (moléstia de Basedow-Graves, diabetes mellitus tipo I e tiroidite de Hashimoto). A primeira endocrinopatia foi a doença de Graves que surgiu aos 12 anos e entrou em remissao após um período de tratamento clínico. As manifestaçoes de SMS surgiram há 5 anos, com enrijecimento e espasmos dolorosos dos músculos axiais, e hipertrofia de deltóide e trapézio, tendo desenvolvido diabetes mellitus insulino-dependente (DMI) 2 anos após SMS. Há 1 ano apresentou também hipotiroidismo subclínico (tiroidite de Hashimoto). Foram detectados anticorpos anti-decarboxilase do ácido glutâmico (anti-GAD) no líquor e no soro da paciente, o que confirma o diagnóstico de SMS. Estes autoanticorpos estao voltados contra uma proteína de massa molecular 64 Kd (GAD) e têm sido detectados em 80 por cento dos pacientes com DMI. Pacientes com SMS apresentam alta prevalência desses autoanticorpos e uma grande associaçao com DMI. Na paciente descrita foi possível detectar autoanticorpos contra vários tecidos alvo (tiróide, pâncreas e neurônios GABA-érgicos). Neste relato discute-se os critérios diagnósticos, a fisiopatologia da SMS e os mecanismos imunológicos que levam ao DMI nesta síndrome.